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    microRNA
    基因突
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shRNA 基因沉默


短发卡RNA (shRNA) 是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA (siRNA, 19-21个核苷酸的RNA 双链)的DNA分子。可根据靶基因设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆入干扰表达载体上。转入细胞实现对目的基因的沉默作用,来研究基因功能及靶点筛选


技术特点

      ♦   技术平台:shRNA-GFP病毒表达载体,筛选基因。

      ♦   构建好的shRNA表达载体,可直接用于脂质体转染靶细胞进行RNA干扰操作

             对于难转染的细胞或者建构建沉默细胞模型,可直接包装成慢病毒后再侵染靶细胞,施药物筛选。

   




赛伯(Cypeogen ) 生物可为您提供shRNA 干扰载体构建和shRNA 干扰细胞株构建定制服务



shRNA干扰载体构建


服务流程

       ♦   针对靶基因设计shRNA序列,合成该序列并退火生成双链DNA。

       ♦   shRNA表达载体构建。

       ♦   转化挑取提取质粒测序。

       ♦   干扰质粒甘油菌种制备(包括阴性对照),完整实验报告。

 

客户提供

       ♦   靶基因在GeneBank 中的序列号。


我们提供

       ♦   一套shRNA表达载体质粒和相应的甘油菌,实验报告。

 

质量保证

       ♦   序列测定结果符合设计要求,在脂质体转染效率>80%条件下,通过Q-PCR检测至少保证其中一条shRNA对靶基因

           表达有干扰效果。








shRNA干扰细胞株(系)构建


服务流程

    

  •  针对靶基因设计4条shRNA序列,合成该序列并退火生成双链DNA。
  •  shRNA表达载体构建。
  •  转化挑取提取质粒测序。
  •  shRNA病毒包装(包括阴性对照),利用病毒上清感染靶细胞。
  •  靶细胞抗药药梯度筛选。
  •  转导48h后观察细胞中GFP荧光确认细胞转染效率。
  •  施药筛选细胞并提取RNA及蛋白做Q-PCR和WB干扰效果检测。
  •  克隆培养及药物筛选获取稳转沉默细胞系。

 


客户提供


  • 靶基因在GeneBank 中的序列号,WB检测抗体及说明书。
  •  靶细胞样品,干扰基因相关信息。若目的基因被沉默后,引起细胞凋亡或老化不增值,公司不承担责任,费用正常收取。

 


我们提供


  •   完整实验报告(含Q-PCR及WB检测数据报告等)。
  •  稳转沉默细胞株系, 规格 1X10^6 。

 


质量保证


  • 序列测定结果符合设计要求,通过Q-PCR和WB检测,在细胞稳定传代过程中靶基因被持续沉默。






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